PCR技術是一種分子生物學技術，用于在幾個數(shù)量級上擴展一段DNA的一個或幾個拷貝，復制數(shù)千到數(shù)百萬個DNA序列。作為一種廉價但可靠的方法，能夠重復復制DNA的聚焦片段。ABI公司的PCR儀器在行業(yè)內受到普遍的歡迎。今天小編 Veriti 梯度PCR儀為例就為您簡單介紹一下具體的操作方法。
步驟：
1、打開PCR儀的熱蓋，插入0.2ml的樣品管，蓋好熱蓋；
2、打開PCR儀的電源，儀器程序開始初始化，需等待幾分鐘；
3、初始化完成后，顯示主菜單；
4、點“Browse/New Methods”，進入PCR程序列表；
5、可以直接點一個PCR程序，選擇“Start Run”運行；點右邊的符號，可以選擇不同的文件夾。如要新建一個PCR程序，點“New”，出現(xiàn)PCR程序；
6、添加一段程序：點中上方的“Stage”位置，該位置變紅；再點“Add”，軟件將加入一段新的程序；
7、修改循環(huán)數(shù)、溫度、時間：點中循環(huán)次數(shù)、溫度或時間位置，下方出現(xiàn)數(shù)字鍵。依次點數(shù)字鍵，出現(xiàn)合適數(shù)字后，點“Done”確定；
8、增加一個步驟：點“Step”位置，該位置變紅；再點“Add”，軟件將加入一個新的步驟；
9、刪除一個步驟：點“Step”位置，在點“Delete”，軟件將該步驟刪除；
10、建立梯度模式：點中一個步驟，再點“Option”鍵；
11、點“VeriFlex step”，出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口；
輸入6個梯度溫度，溫度下方的“1－2”是指對應的1、2兩行加熱孔，全部輸好后，點“Done”確定。注意：相鄰的兩個梯度溫度之差較為大不能*過5℃！
12、建立漸變模式：
1）點中一個步驟，再點“Option”鍵；
2）點“Auto Delta”，出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口；
點“Staring Cycle”，輸入起始循環(huán)數(shù)；點“Delta Temperature”，輸入溫度變化值；點“Delta Time”，輸入時間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR，可以提高PCR反應的特異性。例：輸入起始循環(huán)數(shù)為2，溫度變化值為＋0.5℃，時間變化值為＋5s，則表示從第2個循環(huán)開始，每循環(huán)一次升溫0.5℃，時間增加5s。
13、增加暫停步驟：
1）點中一個步驟，再點“Option”鍵；
2）點“Pause”；
輸入暫停的起始位置，暫停間隔和暫停時間，點“Done”確定。上圖表示每隔10個循環(huán)暫停10s，在10個循環(huán)的第1個循環(huán)之前暫停。
14、編輯PCR程序完成后，點“Save”保存;
點“Run Method”，輸入PCR程序名稱；點，選擇保存PCR程序的文件夾（如果要保存在USB文件夾中，需要先插U盤）。再輸入反應體積和熱蓋溫度（這兩項在運行程序時可以修改）。點“SaveδExit”確定；
15、回到PCR程序列表界面，選擇新建的PCR程序；
16、點“Start Run”，出現(xiàn)運行參數(shù)設置窗口；
17、儀器運行選中的PCR程序，顯示運行監(jiān)視窗口；
18、暫停運行：
點“Pause Run”，儀器暫停，出現(xiàn)暫停選項欄；
“Remaining Time”顯示暫停剩余時間，“Elapse Time”顯示已暫停時間。
如果需要修改暫停時間，點，輸入時間值，點“Done”確定；點“Resume Run”，結束暫停，繼續(xù)運行PCR程序。
19、終止運行：點“Stop”可以終止整個PCR程序；
20、反應報告：
PCR程序結束后，儀器會自動生成反應報告，顯示當次反應的各項指數(shù)。該報告可以保存和打印；
21、PCR反應結束后，打開熱蓋，取出樣品，關閉儀器電源。并開蓋放置，使熱蓋和加熱模塊正常降溫。
以上就是ABI VeritiPCR儀的操作步驟，希望對各位有所幫助。如果您有任疑問，歡迎您咨詢上海旦鼎，期待給您一個滿意的回復。
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